دانلود ترجمه مقاله مقایسه متدهای استخراج مستقیم دی ان ای میکروبی – الزویر ۲۰۱۲

مقایسه متدهای استخراج مستقیم دی ان ای میکروبی از خاک های مختلف شالیزار

Comparisons of direct extraction methods of microbial DNA from different paddy soils

چکیده

۱- مقدمه

۲- مواد و روش ها

۲-۱- جمع آوری نمونه

۲-۲- استخراج DNA خاک

۲-۳- ارزیابی کیفیت و کمیت DNA

۲-۴- خالص سازی DNA

۲-۵- تجزیه و تحلیل های آماری

۳- نتایج و بحث

۴- نتیجه گیری

چکیده

آنالیزهای مولکولی برای مطالعه جمعیت های میکروبی خاک اغلب به استخراج مستقیم DNA از خاک ها بستگی دارد. مطالعه حاضر کارایی سه روش مختلف استخراج DNA میکروبی را از هفت خاک متفاوت شالیزار مقایسه می کند. مقایسه بین روش های مختلف استخراج DNA در مورد نمونه های مختلف خاک شالیزار، در محصول DNA اختلاف مشخصی را از ۱۸/۳-۱۷/۲۰ نشان داد. مقایسه بین روش های مختلف استخراج DNA در نمونه های مختلف خاک شالیزار نشان دهنده اختلاف قابل ملاحظه ای در محصول DNA از ۱۸/۳- ۱۷/۲۰ میکروگرم DNA/ گرم از خاک خشک است. اگرچه صرف نظر از نمونه های خاک و روش های استخراج، اندازه قطعه DNA بیشتر از ۱۰ kb بود. دز بین روش های ارزیابی شده، روش C (شیمیایی- آنزیمی- مکانیکی) کارایی استخراج سلول و محصول DNA بهتری داشت. پس از خالص سازی DNA خام توسط کیت خالص سازی، نسبت A260 /A230 و A260/A280 DNA به دست آمده از طریق روش C به ترتیب به ۲۷/۲ و ۸۹/۱ رسید که کارایی این تکنیک در حذف هیومیک اسید، پروتئین و سایر آلودگی ها را نشان می دهد. نتایج ارزیابی جامع روش های استخراج DNA پیشنهاد کرد که روش C بهتر از دو روش دیگر (شیمیایی- آنزیمی و شیمیایی-مکانیکی) بوده و بهترین انتخاب برای استخراج کل DNA از نمونه های خاک بود. از آنجایی که نوع خاک و خصوصیات جامعه میکروبی روی بازیابی DNA تاثیر می-گذارند، این بررسی راهنمایی را برای انتخاب روش های مناسب استخراج و خالص سازی بر اساس اهداف آزمایشی فراهم کرد.

۴- نتیجه گیری
نتایج این تخمین جامع روش های استخراج DNA پیشنهاد کردند که تمام این روش ها برای استفاده در یک بررسی وسیع درگیر در آنالیز جامع مستقیم خاک های مختلف شالیزار مناسب هستند. اگرچه روش C (استخراج شیمیایی- آنزیمی- مکانیکی و پس از آن خالص سازی DNA) بهتر از دو روش دیگر (شیمیایی- آنزیمی و شیمیایی- مکانیکی) در نظر گرفته شده و بهترین انتخاب برای استخراج DNA کل از نمونه های خاک بود. پروفایل های جذب UV نشان داد که DNA استخراج شده نسبتا عاری از ترکیبات چسبنده خاک مثل هیومیک اسیدها و آلودگی های پروتئین بود. مشخص شده بود که این روش برای استخراج DNA جمعیت میکروبی از خاک های مختلف، قابل اطمینان، ساده، سریع و affordable بود. همچنین مهم است که بدانیم هیچ روش استخراج یا خالص سازی DNA به تنهایی برای تمام خاک ها و تمام اهداف آزمایشی مناسب نیست، زیرا ممکن است عوامل متعددی روی کارایی یک روش استخراج تاثیر بگذارند. ترکیب و اصلاح پروتکل های مختلف ممکن است در برخی موقعیت ها مورد نیاز باشد.

Abstract

Molecular analyses for the study of soil microbial communities often depend on the direct extraction of DNA from soils. The present work compares the effectiveness of three different methods of extracting microbial DNA from seven different paddy soils. Comparison among different DNA extraction methods against different paddy soil samples revealed a marked variation in DNA yields from 3.18–۲۰٫۱۷ μg DNA/g of dry soil. However, irrespective of the soil samples and extraction methods the DNA fragment size was >10 kb. Among the methods evaluated, method-C (chemical–enzymatic–mechanical) had better cell lysis efficiency and DNA yield. After purification of crude DNA by Purification Kit, A260/A230 and A260/A280 ratios of the DNA obtained by method-C reached up to 2.27 and 1.89, respectively, sustaining the efficacy of this technique in removing humic acid, protein and other contaminants. Results of the comprehensive evaluation of DNA extraction methods suggest that method-C is superior to other two methods (chemical–enzymatic and chemical–mechanical), and was the best choice for extraction of total DNA from soil samples. Since soil type and microbial community characteristics influence DNA recovery, this study provides guidance for choosing appropriate extraction and purification methods according to experimental goals.

۴٫ Conclusion

The results of this comprehensive evaluation of DNA extraction methods suggest that all of these methods were suitable for use in a large-scale study involving the direct comparative analysis of different paddy soils. However, method-C (chemical–enzymatic–mechanical lysis followed by DNA purification) proved to be superior to other two methods (chemical–enzymatic and chemical–mechanical), and was the best choice to extract total DNA from soil samples. UV absorption profiles showed that extracted DNA was relatively free of adhering soil components such as humic acids and protein contaminants. This method was found to be reliable, simple, rapid, and affordable for microbial community DNA extraction from different soils. It is, however, important to recognize that no single method of DNA extraction or purification will be appropriate for all soil types and experimental goals, as there are multiple factors that may affect the performance of an extraction method. Combinations and modifications of different protocols might be needed for some conditions.

تصویری از مقاله ترجمه و تایپ شده در نرم افزار ورد

مقایسه متدهای استخراج مستقیم دی ان ای میکروبی از خاک های مختلف شالیزار

Comparisons of direct extraction methods of microbial DNA from different paddy soils