تشخیص مولکولی بهبود یافته کووید 19 با روش جدید، بسیار حساس و اختصاصی COVID-19-RdRp/Hel رونویسی معکوس-PCR در زمان واقعی که در شرایط آزمایشگاهی و با نمونه های بالینی تایید شده است

Improved Molecular Diagnosis of COVID-19 by the Novel, Highly Sensitive and Specific COVID-19-RdRp/Hel Real-Time Reverse Transcription-PCR Assay Validated In Vitro and with Clinical Specimens

چکیده
مواد و روش ها
نتایج
بحث
منابع

چکیده
در 31 دسامبر 2019، سازمان بهداشت جهانی از گروهی از موارد واگیردار ناشی از علل ناشناخته در ووهان چین باخبر شد. ارزیابی های بعدی یک کرونا ویروس جدید را شناسایی کردند که در حال حاضر بر اساس بیماران تحت تاثیر قرارگرفته، سندرم شدید حاد تنفسی کرونا ویروس 2 (SARS-CoV-2) نامگذاری شده است. تشخیص های به شدت حساس و خاص آزمایشگاهی برای کنترل سریع اپیدمی بیماری کرونا ویروس مرتبط با SARS-CoV-2 (COVID-19) حائز اهمیت هستند. در این مطالعه، ما عملکرد سه آزمایش جدید رونویسی معکوس در زمان واقعی-PCR (RT-PCR) را توسعه داده و مقایسه کردیم که هدف آن RNA پلیمراز وابسته به RNA، (RdRp)/helicase (Hel), spike (S) و ژن های نوکلئوکپسید (N) SARS-CoV-2 با موارد گزارش شده در آزمون RdRp-P2 بود که در بیش از 30 آزمایشگاه اروپا مورد استفاده قرار می گیرد. در میان این سه آزمایش جدید، تست COVID-19-RdRp/Hel دارای کمترین حد شناسایی در شرایط in vitro است (1.8 از 50% بافت کشت شده از دزهای آلوده شده [TCID50]/ml با RNA ژنومی و 11.2 واکنش/کپی از RNA در رونویسی in vitro در RNA). در میان 273 نمونه حاصل از 15 بیمار که در آزمایشگاه هونگ کونگ از نظر COVID-19 تایید شدند، 77 مورد (28.2%) آن ها از نظر تست COVID-19-RdRp/Hel و RdRp-P2 مثبت بودند. تست RdRp/Hel کووید19 برای 42 نمونه دیگر RdRp-P2-negative نیز مثبت بود (119/273 (43.6%) در مقابل 77/273 (28.2%)؛ P<0.001)، شامل 120/29 (24.2%) نمونه دستگاه تنفسی و 153/13 (8.5 %) نمونه های غیر از دستگاه تنفسی بوده است. میانگین حجم ویروس در این نمونه ها 3.21 ×104 رونوشت RNA/ml است ( در محدوده 2.21 ×102 تا 4.71 ×105 رونوشت RNA/ml). تست COVID-19-RdRp/Hel واکنش متقابلی با سایر کروناویروس های بیماری زای انسانی و عوامل بیماری زای تنفسی در کشت سلولی و نمونه های بالینی ندارد، در حالی که بین تست RdRp-P2 و SARS-CoV در کشت سلولی واکنش متقابل وجود دارد. تست به شدت حساس و خاص COVID-19-RdRp/Hel ممکن است به بهبود تشخیص آزمایشگاهی COVID-19 کمک کنند.

در 31 دسامبر 2019، سازمان بهداشت جهانی از گروهی از موارد واگیر یک بیماری ناشناخته در ووهان، استان هوبی در چین خبر داد (https://www.who.int/westernpacific/emergencies/covid-19). ارزیابی بعدی نشاندهنده یک کروناویروس جدید است که ارتباط نزدیکی با سندرم حاد تنفسی کرونا ویروس (SARS_CoV) در این بیماران دارد (1-3). این ویروس جدید اخیراً توسط گروه مطالعاتی کروناویروس در انجمن بین المللی رده بندی ویروس ها به نام سندرم حاد تنفسی کروناویروس 2 نامگذاری شده است (4). بیشتر بیماران مبتلا به آلودگی SARS-CoV-2 یا بیماری کروناویروس 2019 (COVID-19) علائمی از تب شدید، درد عضله، سرفه و شواهد رادیولوژی از کدر شدن زمینه شفاف شش خبر می دهند که قابل مقایسه با بیماری ذات الریه است (5-7). با این وجود، موارد بدون علامت یا علامت خفیف نیز گزارش شده است (2، 8-10). ارزیابی های اپیدمیولوژی اولیه نشان داد که بازار خرده فروشی غذاهای دریایی هونان در ووهان به عنوان یک منبع مکانی مرتبط بوده، اما ارزیابی اپیدمیولوژی مفصل بعدی نشان داد که بیش از 45% موارد اخیر با بروز علائم قبل از 1 ژانویه 2020 ارتباطی با این بازار نداشتند (5.11). انتقال فرد به فرد در میان تماس نزدیک خانواده و کارکنان بخش مراقبت بهداشتی، از جمله افرادی که سابقه سفر به ووهان را داشتند، گزارش شد (2، 7، 12، 13). در نتیجه خصوصیات بالینی و ارتباط اپیدمیولوژی با ووهان به تنهایی برای تشخیص COVID-19 قابل اتکا نیست.

مواد و روش ها
ویروس ها و نمونه های بالینی. SARS-CoV-2 از یک بیمار در هنگ کنگ گرفته شد که COVID-19 آن در آزمایشگاه تایید شد (22). جدایه ویروس با یک قطعه اضافی در سلول های VeroE6 تکثیر شد تا یک استوک کاری از ویروس ساخته شود ( 1.8 ×107 یعنی 50% کشت بافت دزهای آلوده [TCID50]/ml). برای ارزیابی اختصاصیت در شرایط in vitro، آرشیو ایزوله های کشت آزمایشگاهی (n=17) در سایر کروناویروس های بیماریزای انسان و ویروس های تنفسی مورد استفاده از دپارتمان میکروبیولوژی دانشگاه هنگ کنگ که پیشتر توضیح داده شده به دست آمدند (23). همه پروتکل های آزمایشگاهی شامل SARS-CoV-2 زنده، SARS-CoV و MERS-CoV بودند که از روش اجرای استاندارد تایید شده در سطح 3 امکانات امنیت زیستی پیروی می کنند که پیشتر توضیح داده شد (24.25). برای ارزیابی بالینی، تعداد 273 نمونه بالینی (120 مورد از دستگاه تنفسی و 153 مورد از غیر دستگاه تنفسی) از 15 بیمار جمع آوری شد که COVID-19 آن ها در آزمایشگاه هنگ کنگ تایید شد که تست نمونه های آسپیرات/سواب، نازوفارنکس، سواب های گلو، و یا نمونه های خلط آن ها برای SARS-CoV-2 RNA از طریق آزمایش RdRp2 مثبت شد (22). علاوه بر این، عصاره نوکلئیک اسید کل در 22 نمونه ذخیره شده (ذخیره در -80 درجه تا زمان مصرف)، آسپیرات های نازوفارنکس/سواب ها و سواب-های گلو از 22 بیمار بالغ جمع آوری شدند که در بیمارستان هنگ کنگ از نظر علائم تنفسی زیاد/یا پایین مدیریت شده و این تست برای سایر عوامل بیماریزای تنفسی FilmArray RP2 مثبت بود (تشخیص BioFire، Salt Lake City, UT, USA) و بر اساس دستورالعمل کارخانه برای ارزیابی پتانسیل واکنش متقابل با سایر عوامل بیماریزای تنفسی در نمونه های بالینی مورد ارزیابی قرار گرفت. این مطالعه توسط بررسی صورت گرفته در دانشگاه هنگ کنگ/مدیریت بیمارستان تایید شد (UW 14-249).

استخراج اسید نوکلئیک. عصاره نوکلئیک اسید (TNA) در نمونه های بالینی و کشت سلول آزمایشگاهی در جدایه های ویروسی با استفاده از سیستم عصاره گیری NucliSENS easyMAG (bioMérieux,Marcy-l’Étoile, France) و بر اساس دستورالعمل کارخانه که پیشتر توضیح داده شده بود، انجام شد (24). حجم نمونه های مصرفی برای استخراج و حجم رقیق سازی به نوع نمونه و مقدار نمونه موجود بستگی دارد. به طور کلی، 250 lµ از نمونه دستگاه تنفسی، نمونه ادرار، سواب روده و مدفوع تحت عصاره گیری با یک حجم رقیق شده 55 lµ قرار گرفت و 100 lµ از هر نمونه پلاسما با حجم رقیق سازی 25 lµ عصاره گیری شد. عصاره حاصل تا زمان مصرف در 80- درجه سانتیگراد ذخیره شد. عصاره مشابه حاصل از هر نمونه برای همه RT-PCRها مورد استفاده قرار گرفت.

موفقیت در لقاح آزمایشگاهی و عوامل مرتبط با آن: یک مطالعه گروهی موثر در آینده

In Vitro Fertilization Success and Associated Factors: A Prospective Cohort Study

چکیده

معرفی

مواد و روش ها

اندازه گیری

آنالیزهای آماری

نتایج

بحث

نتیجه گیری

چکیده

اهداف: موفقیت در لقاح آزمایشگاهی (IVF)، به عوامل زیادی بستگی دارد که عوامل مستقل آن به طور کامل و جامع مورد بررسی قرار نگرفته است. هدف از این مطالعه ارزیابی نقش عوامل وابسته با آن در زنان تحت (IVF) در ایران بوده است. 

مواد و روش ها: در این مطالعه هم گروهی آینده نگرانه، 160 زنی که به مرکز ناباروری بیمارستان محب یاس برای (IVF) بین مارس 2015 و مارس 2016 مراجعه کرده بودند، وارد این مطالعه شدند. پروتکل تحریک طولانی مدت تخمدان با استفاده از آگونیست هورمون آزادکننده ی گنادوتروپین (GnRH) تهیه شد. هورمون آنتی مولرین (AMH)، پروژسترون، استرادیول و ضخامت آندومتر اندازه گیری شد. دو جنین شناس متخصص، بلاستوسیت ها را براساس خوب یا ضعیف بودن، طبقه بندی کردند. پس از گذشت 14 یا 15 روز از انتقال جنین، حاملگی با اندازه گیری گنادوتروپین کوریونی سرم انسانی مورد تشخیص قرار گرفت. 

نتایج: میانگین سن افراد 32 سال و میانگین شاخص وزن بدن (BMI)  20 kg/m2   بوده است. میزان بالینی حاملگی 20.6% بوده است. ارتباط معنی داری بین موفقیت IVF و هورمون آنتی مولرین، تعداد تزریقات FSH، ضخامت آندومتر رحم، مقطع جنین و تعداد جنین های تولید شده نیز یافت شد. آنالیزهای رگرسیون مربوطه نشان داد که تنها هورمون آنتی مولرین (AMH) > 6/0 پیش بینی کننده ی مستقل موفقیت IVF می باشد (odds ratio [OR] = 6.22, CI [2.4-16.2]). آنالیزهای بعدی نشان داد که ارتباط معنی داری بین  سطح AMH و موفقیت IVF در زنان 35 سال و کمتر وجود دارد. 

نتیجه: میزان موفقیت کلی IVF/ET 20.6% بوده است. AMH یک پیش بینی کننده ی معنی دار در موفقیت IVF است و ممکن است فاکتور مهمی در موفقیت  IVF در زنان جوان باشد. 

نتیجه گیری

میزان موفقیت کلی IVF/ET ،6/20 % بوده است. AMH یک پیش بینی کننده مستقل موفقیت IVF بعد از اصلاح تعداد جنین های تولید شده می باشد. به دلیل کوچک بودن سایز نمونه های مطالعاتی در ایران، توصیه ما این است که از متا آنالیز برای بررسی عوامل درگیر در موفقیت IVF استفاده شود.

Abstract

Objectives: In vitro fertilization (IVF)success depends on many factors whose independent roles have not been fully investigated. The aim of this study was to evaluate the role of associated factors in women undergoing IVF in Iran.

Materials and Methods: In a prospective cohort study, 160 women who referred to infertility center of Moheb-Yas hospital for IVF between March 2015 and March 2016 were enrolled. A long ovarian stimulation protocol was administered using a gonadotropin-releasing hormone agonist (GnRH). Anti-Mullerian hormone (AMH), progesterone, estradiol, and endometrial thickness were measured. Two expert embryologists categorized blastocysts as good or poor. Pregnancy was judged by serum human chorionic gonadotropin measurement 14?15 days after embryo transfer.

Results: Mean age of the cases was 32 years and mean body mass index (BMI) was 20 kg/m2. Clinical pregnancy rate was 20.6%. A significant relationship was found between IVF success and AMH, the number of FSH injections, endometrial thickness, grade of the embryos, and the number of embryos produced. Logistic regression analysis showed that only AMH > 0.6 was an independent predictor of IVF success (odds ratio [OR] = 6.22, CI [2.4-16.2]). Further analysis showed a significant relationship between AMH level and IVF success in women ?35.

Conclusions: The overall success rate of IVF/ET was 20.6%. AMH is a significant predictor of IVF success and may be an important factor in IVF success in young women.

Conclusions

The overall success rate of IVF/ET was 20.6%. AMH was an independent predictor of IVF success after adjustment for the number of embryos produced. Due to the small sample size in studies in Iran, we recommend that a meta-analysis on the factors involving in IVF success be conducted.

تصویری از مقاله ترجمه و تایپ شده در نرم افزار ورد

موفقیت در لقاح آزمایشگاهی و عوامل مرتبط با آن: یک مطالعه گروهی موثر در آینده

In Vitro Fertilization Success and Associated Factors: A Prospective Cohort Study

تست‌های آزمایشگاهی مواد مخدر (شبه افیونی) تجویزی

Laboratory Testing for Prescription Opioids

• برای دانلود رایگان مقاله انگلیسی با فرمت pdf بر روی عنوان انگلیسی مقاله کلیک نمایید.
• برای خرید و دانلود ترجمه فارسی آماده با فرمت ورد، روی عنوان فارسی مقاله کلیک کنید.

تصویری از مقاله ترجمه و تایپ شده در نرم افزار ورد

تست آزمایشگاهی برای نسخه های داروهای مخدر

Laboratory Testing for Prescription Opioids

• برای دانلود رایگان مقاله انگلیسی با فرمت pdf بر روی عنوان انگلیسی مقاله کلیک نمایید.
• برای خرید و دانلود ترجمه فارسی آماده با فرمت ورد، روی عنوان فارسی مقاله کلیک کنید.

تاثیر اسانس های روغنی و اجزای آنها روی تخمیر میکروبی سیرابی (rumen) در محیط آزمایشگاهی

Effects of essential oils and their components on in vitro rumen microbial fermentation

• برای دانلود رایگان مقاله انگلیسی با فرمت pdf بر روی عنوان انگلیسی مقاله کلیک نمایید.
• برای خرید و دانلود ترجمه فارسی آماده با فرمت ورد، روی عنوان فارسی مقاله کلیک کنید.

تاثیر اسانس های روغنی و اجزای آنها روی تخمیر میکروبی سیرابی (rumen) در محیط آزمایشگاهی

Effects of essential oils and their components on in vitro rumen microbial fermentation

• برای دانلود رایگان مقاله انگلیسی با فرمت pdf بر روی عنوان انگلیسی مقاله کلیک نمایید.
• برای خرید و دانلود ترجمه فارسی آماده با فرمت ورد، روی عنوان فارسی مقاله کلیک کنید.