دانلود ترجمه مقاله ویژگی های سلول های بنیادی پرتوان – 2013 NATURE

ویژگی های سلول های بنیادی پرتوان

Characterization of pluripotent stem cells

مقدمه

آزمایشاتی برای تشخیص لاین ESC و iPSC

آنالیز DNA fingerprinting و HLA

مقایسه با سایر روش ها

طراحی آزمایش

مواد و روش ها

مواد

روش

رنگ آمیزی AP . زمان رنگ آمیزی 30 دقیقه

تشخیص پرتوانی . زمان بندی : 2 روز

عیب یابی

تشخیص تمایز در Ebs

عیب یابی

تشخیص افتراقی با EBs در یک slideFlask . زمان بندی: 3 روز

تشخیص تمایزی در تراتوما . زمان بندی : 4 روز

a)غوطه ور سازی در پارافین . زمان بندی 6 تا 8 روز

(B) تکثیر سلولی در تراتوما . زمان بندی: 6 تا 8 روز

(c) تشخیص مرگ سلول در برابر تکثیر در تراتوما . زمان بندی: 7 روز

عیب یابی

نتایج پیش بینی شده

چکیده

توصیف سلول های بنیادی پرتوان برای ثبت سلول های بنیادی ضروری است و امکان مقایسه ی بی طرف و عینی نتایج حاصل از تولید لاین های چندگانه را فراهم می آورد. بنابراین بسیار مهم است که پرتکل های خاص ، سریع و قابل اعتماد برای تشخیص نشانه های پرتوانی فراهم کنیم. چنین پروتکل هایی باید شامل ایمونوسیتوشیمی (2 روز طول می کشد)، شناسایی سه لایه زایا در بدن جنین های حاصل از in vitro توسط ایمونوسیتوشیمی (تشخیص ایمنی 3 روز طول می کشد) و تشخیص مارکرهای تمایز در تراتومهای تولید شده در in vivo توسط ایمونوهیستوشیمی (تشخیص مارکر تمایزی 4 روز طول می کشد) باشد. استاندارد سازی پروتکل های تشخیص ایمنی حداقل تغییرات به دلیل منبع، گونه های حیوانی، فلوروسنس درون زا و یا عدم توانایی جمع آوری مقادیر زیادی از سلول ها را تضمین می کند، در نتيجه نتایج هرچه سریعتر بدون کاهش کيفيت حاصل می شوند. این پروتکل شرحی از تمام روشهای تشخیص ایمنی لازم برای مشخص کردن رده های سلول بنیادی موش و انسان در شرایط مختلف را ارائه می دهد.

نتایج پیش بینی شده
رنگ آمیزی AP اولین مرحله برای بررسی این است که آیا یک رده سلول پرتوان است یا خیر. سیگنال آبی روشن باید در کلنی ها دیده شود، اما هیچ رنگی از فیدرها نباید مشاهده شود (شکل 8). بعد، تشخیص ایمنی از سلول ها برای نشانگرهای مختلف سلول های بنیادی را انجام دهید. مارکرهای هسته ای Oct4، Nanog و Sox2 باید به هسته سلول های بنیادی محدود شود، بدون هیچ گونه سیگنال در سیتوپلاسم و فیدرها. نشانگرهای SSEA- و Tra- mark باید در غشا بیان شوند. سلول های انسانی و موش نتایج مختلفی هم در بیان مارکر و هم در مورفولوژی نشان می دهند . کلونی های انسانی مسطح یا به شکل مثلثی دیده می شوند (شکل 9)، در حالی که کلنی های موش ضخیم تر و گرد هستند (شکل 10).
اگر تشخیص ایمنی برای نشانگرهای سلول های بنیادی نشان دهد که سلول ها پرتوان هستند، مرحله بعدی رشد EB است. ساختارهای مختلفی از سه لایه زایا که در EB رشد می کنند بسیار مشخص هستند. معمولا در مرکز EB، برخی از ساختارهای کروی مشاهده می شود که نشان دهنده نتایج مثبت برای نشانگرهای اندودرمال هستند (شکل 11a، b).

Abstract

Characterization of pluripotent stem cells is required for the registration of stem cell lines and allows for an impartial and objective comparison of the results obtained when generating multiple lines. It is therefore crucial to establish specific, fast and reliable protocols to detect the hallmarks of pluripotency. Such protocols should include immunocytochemistry (takes 2 d), identification of the three germ layers in in vitro–derived embryoid bodies by immunocytochemistry (immunodetection takes 3 d) and detection of differentiation markers in in vivo–generated teratomas by immunohistochemistry (differentiation marker detection takes 4 d). Standardization of the immunodetection protocols used ensures minimum variations owing to the source, the animal species, the endogenous fluorescence or the inability to collect large amounts of cells, thereby yielding results as fast as possible without loss of quality. This protocol provides a description of all the immunodetection procedures necessary to characterize mouse and human stem cell lines in different circumstances.

ANTICIPATED RESULTS

AP staining is the first stage for checking whether a cell line is pluripotent. A clear blue signal should be seen in the colonies, but no staining of the feeders should be observed (Fig. 8). Next, perform an immunodetection of the cells for a variety of stem cell markers. The nuclear markers Oct4, Nanog and Sox2 must be limited to the nuclei of the stem cells, without any signal in the cytoplasm or feeders. The SSEA- and the Tra- markers should be expressed in the membranes. Human and mouse cells will give different results both in marker expression and in morphology. Human colonies are flat with oval or triangular form (Fig. 9), whereas mouse colonies are thicker and round (Fig. 10). If the immunostaining for stem cell markers suggests that cells are pluripotent, then the next stage is to grow EBs. The different structures of the three germ layers that grow in EBs are very characteristic. Usually, in the center of the EB, some globular structures can be observed, and give positive results for the endodermal markers (Fig. 11a,b).

تصویری از مقاله ترجمه و تایپ شده در نرم افزار ورد

ویژگی های سلول های بنیادی پرتوان

Characterization of pluripotent stem cells