دانلود ترجمه مقاله آزمایش رنگ سنجی سریع برای ارزیابی رشد و بقای سلولی – الزویر 1983

آزمایش رنگ سنجی سریع برای ارزیابی رشد و بقای سلولی: استفاده از آن در سنجش تکثیر و سمیت سلولی

Rapid Colorimetric Assay for Cellular Growth and Survival: Application to Proliferation and Cytotoxicity Assays

مقدمه

مواد و روش ها

رده های سلولی

تست رنگ سنجی MTT (تترازولیوم)

تست اینترلوکین2

تکثیر سلول های طحال توسط میتوژن

پردازش کامپیوتری

نتایج

بحث

منابع

چکیده

نمک تترازولیوم در تست رنگ سنجی کمّی برای بررسی بقا و تکثیر سلول های پستانداران مورد استفاده قرار می گیرد. این تست سلول های زنده و نه سلول های مرده را شناسایی می کند و سیگنال تولید شده به درجه ی فعال شدن سلول ها بستگی دارد. بنابراین از این روش می توان برای اندازه گیری میزان سمیت سلولی، تکثیر و فعال شدن سلول ها استفاده کرد. نتایج را می توان بر روی یک اسپکتروفتومتر چند منظوره با قابلیت اسکن (الایزا ریدر) قرائت کرد که درجه ی بالایی از دقت را نشان می دهد. در این تست، هیچ مرحله ی شستشویی وجود ندارد. از مزیت های مهم تست رنگ سنجی، سرعت و دقت آن و عدم استفاده از رادیو ایزوتوپ است. ما همچنین از این تست به منظور اندازه گیری لنفوکین های تکثیرشونده، تحریکات میتوژن و لیز سلولی توسط کمپلمان استفاده کرده ایم.

بحث

شکست بلورهای MTT دارای ویژگی های مطلوبی برای ارزیابی بقا و تکثیر سلولی است. بلورهای MTT توسط سلول های زنده، سلول های فعال از نظر متابولیک که ما آنها را بررسی کردیم؛ شکسته می شوند اما سلول های مرده یا گلبول های قرمز قادر به شکست MTT نیستند. در یک جمعیت سلولی همگن، مقدار فورمازان تولید شده ارتباط مستقیمی با تعداد سلول های زنده دارد. سلول های فعال نسبت به سلول های در حال استراحت، فورمازان بیشتری تولید می کنند؛ همین موضوع امکان ارزیابی فعالیت سلول را حتی در صورت عدم تکثیر فراهم می کند. این ویژگی ها همگی با شکست MTT توسط میتوکندری فعال مطابقت دارند. مزیت اصلی تست رنگ سنجی، سرعتی است که در آن می توان نمونه ها را پردازش کرد. سوبسترای تولید شده با اندازه گیری محصول تداخل نمی کند و ما شرایطی را یافتیم که در آن اجزای محیط کشت تداخل ایجاد نمی کنند. همین موضوع باعث می شود بدون مرحله ی شستشو بتوان نتایج را قرائت کرد؛ این ویژگی سرعت تست را افزایش می دهد و تغییرات بین نمونه ها را به حداقل می رساند. انجام مراحل نهایی تست (افزودن MTT، قرائت پلیت و چاپ نتایج) زمان بسیار کمتری نسبت به راه اندازی آزمایش (مخلوط کردن سلول ها با رقت های فاکتور رشد) می برد. نتایج تست را می توان چند دقیقه بعد از افزودن اسید- ایزوپروپانول قرائت کرد و رنگ تولید شده چند ساعت در دمای اتاق پایدار است. نتایج نیز با چشم قابل مشاهده هستند که اگر نتایج کیفی سریع مورد نیاز باشد؛ این ویژگی بسیار مفید خواهد بود.

Abstract

A tetrazolium salt has been used to develop a quantitative colorimetric assay for mammalian cell survival and proliferation. The assay detects living, but not dead cells and the signal generated is dependent on the degree of activation of the cells. This method can therefore be used to measure cytotoxicity, proliferation or activation. The results can be read on a multiwell scanning spectrophotometer (ELISA reader) and show a high degree of precision. No washing steps are used in the assay. The main adavantages of the colorimetric assay are its rapidly and precision, and the lack of any radioisotope. We have used the assay to measure proliferative lymphokines, mitogen stimulations and complement-mediated lysis.

Discussion

The cleavage of MTT has several desirable properties for assaying cell survival and proliferation. MTT is cleaved by all living, metabolically active cells that we have tested, but not by dead cells or erythrocytes. The amount of formazan generated is directly proportional to the cell number over a wide range, using a homogeneous cell population. Activated cells produce more formazan than resting cells, which could allow the measurement of activation even in the absence of proliferation. These properties are all consistent with the cleavage of MTT only by active mitochondria. The main advantage of the colorimetric assay is the speed with which samples can be processed. The substrate does not interfere with measurement of the product, and we have found conditions in which components of the medium do not interfere. This allows the assay to be read with no removal or washing steps, which increases the speed of the assay and helps to minimize variability between samples. The final stages of the assay (adding the MTI’, reading the plate and printing the data) take much less time than setting up the assay (mixing cells and growth factor dilutions). The assay can be read a few minutes after the addition of acid-isopropanol, and the color is stable for a few hours at room temperature. The results are also apparent visually, which is very useful if rapid qualitative results are required.

تصویری از مقاله ترجمه و تایپ شده در نرم افزار ورد

آزمایش رنگ سنجی سریع برای ارزیابی رشد و بقای سلولی: استفاده از آن در سنجش تکثیر و سمیت سلولی

Rapid Colorimetric Assay for Cellular Growth and Survival: Application to Proliferation and Cytotoxicity Assays