دانلود ترجمه مقاله القای دودمانی چند قوه زا از جنین و فیبروبلاست موش بالغ (CellPress 2006) (ترجمه ویژه – طلایی ⭐️⭐️⭐️)

القای دودمانی چند قوه زا از جنین و فیبروبلاست موش بالغ توسط عوامل تعریف شده

Induction of Pluripotent Stem Cells from Mouse Embryonic and Adult Fibroblast Cultures by Defined Factors

خلاصه

مقدمه

نتایج

بحث

فرایندهای آزمایشگاهی

کشت سلولی

آلودگی رتروویرال

ساخت پلاسمید

ساخت تراتوم و آنالیز بافت شناسی

توالی ژنومی بیسولفیت

تعیین کاریوتایپ و SSLP با استفاده از PCR

آنالیز وسترن بلات

RT-PCR برای ژنهای مارکر

DNA Microarray

تمایز درون سلولی سلول های iPS

آزمون ايمنوپرسیپیتیشن کروماتين

داده های تکمیلی

خلاصه

سلول های تمایز یافته را می توان با انتقال محتویات هسته ای به تخمک ها یا از طریق ادغام با سلول های بنیادی جنینی (ES)، به یک حالت مشابه جنینی ، دوباره برنامه ریزی کرد( کاری کرد که سلول های تمایز یافته مجددا به حالتی مشابه حالت جنینی برگردند). در مورد عواملي كه در این پروسه (برنامه ریزی دوباره) دخیل هستند،اطلاعات كمي موجود است. در اینجا، القاء سلول های بنیادی پرتوان را از فیبروبلاست های جنینی یا بالغ موش را با اضافه کردن چهار عامل Oct3 / 4، Sox2، c-Myc و Klf4 تحت شرایط کشت سلولی ES نشان می دهیم. به طور غیرمنتظره Nanog قابل چشم پوشی بود. این سلول ها که ما آنها را IPS (سلول های بنیادی پرتوان القا شده) نامیدیم، ویژگی های مورفولوژی و رشد سلول های ES را نشان می دهند و ژن های نشانگر سلولی ES را بیان می کنند. پیوند زیر جلدی سلول های iPS به موش های برهنه منجر به ایجاد تومورهای حاوی انواع بافت از هر سه لایه زایشی می شود. سلول های iPS پس از تزریق به بلاستوسيست ها به رشد جنین موش کمک کردند. این داده ها نشان می دهد که سلول های بنیادی پرتوان می توانند به طور مستقیم از کشت فیبروبلاست ها از طریق افزودن تنها چند عامل تعریف شده تولید شوند.

تمایز درون سلولی سلول های iPS

سلول ها توسط تريپسيناسيون برداشت شده و به داخل ظرف محيط کشت باکتریایی ES بدون G418 يا LIF انتقال داده شدند. بعد از ۳ روز، سلولهای جمع شده روی ظروف کشت بافت کوت شده با ژلاتین قرار داده شدند و ۳ روز دیگر انکوبه شدند. این سلولها با آنتی بادی مونوکلونال ضد آکتین عضلانی صاف (N1584، Dako)، آنتی بادی پلی کلونال ضد afetoprotein (N1501، Dako) یا آنتی بادی مونوکلونال ضد bIII tubulin (CBL412، Abcam) همراه با ۴۰-۶-diamidino- 2-phenylindole ( (Sigma رنگ آمیزی شدند. RNA کامل استخراج شده از بدن های جنینی در پلیت در روز ۶ برای آنالیز RT-PCR مورد استفاده قرار گرفت.

SUMMARY

Differentiated cells can be reprogrammed to an embryonic-like state by transfer of nuclear contents into oocytes or by fusion with embryonic stem (ES) cells. Little is known about factors that induce this reprogramming. Here, we demonstrate induction of pluripotent stem cells from mouse embryonic or adult fibroblasts by introducing four factors, Oct3/4, Sox2, c-Myc, and Klf4, under ES cell culture conditions. Unexpectedly, Nanog was dispensable. These cells, which we designated iPS (induced pluripotent stem) cells, exhibit the morphology and growth properties of ES cells and express ES cell marker genes. Subcutaneous transplantation of iPS cells into nude mice resulted in tumors containing a variety of tissues from all three germ layers. Following injection into blastocysts, iPS cells contributed to mouse embryonic development. These data demonstrate that pluripotent stem cells can be directly generated from fibroblast cultures by the addition of only a few defined factors.

In Vitro Differentiation of iPS Cells

Cells were harvested by trypsinization and transferred to bacterial culture dishes in the ES medium without G418 or LIF. After 3 days, aggregated cells were plated onto gelatin-coated tissue culture dishes and incubated for another 3 days. The cells were stained with antia-smooth muscle actin monoclonal antibody (N1584, Dako), anti-afetoprotein polyclonal antibody (N1501, Dako) or anti-bIII tubulin monoclonal antibody (CBL412, Abcam) along with 40 -6-diamidino2-phenylindole (Sigma). Total RNA derived from plated embryoid bodies on day 6 was used for RT-PCR analysis.

تصویری از مقاله ترجمه و تایپ شده در نرم افزار ورد

القای دودمانی چند قوه زا از جنین و فیبروبلاست موش بالغ توسط عوامل تعریف شده

Induction of Pluripotent Stem Cells from Mouse Embryonic and Adult Fibroblast Cultures by Defined Factors