دانلود رایگان ترجمه مقاله مهار مستقل تيروزين کيناز در سلول های لیومیوسارکوم رحم – الزویر ۱۹۹۶

مقاله انگلیسی رایگان (PDF)

ترجمه فارسی رایگان (PDF)

خرید ترجمه با فرمت ورد

بخشی از ترجمه فارسی مقاله:

کانال های سریع Na + وابسته به ولتاژ ممکن است نقش کلیدی در تحریک پذیری و انتشار عضله صاف رحم در طول کار داشته باشند [۱]. پروتئین فسفوریلاسیون (در گروه های سریین و / یا ترئونین) فرایند نظارتی عمده برای تلفیق کانال های یونی مانند کانال های Ca2 + L در سلول های عصبی، سلول های قلب و سلول های عضله صاف است [۲،۳].در سلولهای عضلانی صاف، cAMP و cGMP (و پروتئین کیناز مربوطه) ،جریان L2 Ca2 + (/ Ca (L) را تلفیق نمیکند) [۱]، در حالی که پروتئین کیناز C (PKC)] مورد ، / Ca (L) [4 راافزایش میدهد.همچنین برخی گزارش ها در مورد تلفیق کانال های سریع Na + توسط cAMP [5] یا PKC [6] وجود دارد.با این حال، در سلول های myometri، cAMP، cGMP، و PKC به نظر نمی رسد ،جریان سریع Na + در (۱Na(f)) را تلفیق کند.برای بررسی تلفیق احتمالی کانال های Na + توسط پروتئین کیناز اختصاصی تیروزیین در سلول های رحم، ما اثر ژنستئین، مهار کننده پروتئین کیناز تیروزین (TPK) را بررسی کردیم.
نشان داده شده است که تروستین کیناز با انتقال سیگنال برای عوامل رشد مختلف مانند فاکتور رشد اپیدرمال (EGF)، فاکتور رشد فیبروبلاست (FGF) [8]، فاکتور رشد پلاکتی (PDGF) 9)در ارتباط است.برای انسولین [۱۰]. در سلول های عصبی، این عوامل رشد منجر به بیان کانال های Na + سریع در نورون های پایه ی [۱۱]، FGF جهت افزایش / Ca (L) [12،۱۳] میباشد.گزارش شده است که مهار کننده های TPK مانند ژنستئین جریان Ca2 را در سلول های عضلانی عروقی برای فعال کردن یک کانال کاتیونی غیر انتخابی [۱۵]متوقف می کنند [۱۴] و با این حال، هیچ گزارشی درمورد تنظیم جریان سریع Na + (INa (f)) توسط TPK منتشر نشده است.
در این مطالعه، ما تلفیق احتمالی کانال های سریع Na+ را با استفاده از TPK در سلولهای لیومیوسارکومای رحم انسان و با مطالعه ی اثر مهارکننده های TPK با استفاده از انبرک جداکننده سلولی مورد بررسی قرار دادیم.سلول (SK-UT-1B)، که از رحم انسان استخراج شده است برای این مطالعه مورد استفاده قرار گرفته‌ است چون این مدل خوبی برای سلول های عضلانی رحم موش های صحرایی باردار است.نشان داده شد که سلول های میوموتریال موش در طول بارداری دیررس، کانال های سریع + Na + را دریافت می کنند که ممکن است در کار طبیعی نقش مهمی ایفا کنند [۱۶،۱۷].ما دریافتیم که سلول لیومیوسارکوم نیز INa (f) را تحت کنترل یک یا چند عامل در سرم قرار می دهند.علاوه بر این، INa (f) تقریبا ۱۰ برابر بیشتر در تراکم در سلول لیومیوسارکوم، در مقایسه با سلول میوموتریال موش صحرایی باردارقرار دارد.ما دریافتیم که INa (f) توسط هر دو مهار کننده TPK، ژنیستئین و آنالوگ غیر فعال آن،یعنی daidzein، مهار می شود.بنابراین، فعالیت TPK درونی ممکن است در تنظیم فعالیت کانال Naé در سلول های میوموتریال دخالت نداشته باشد.

خط سلولی لیومایوسارکوم انسانی از مجموعه تایپ کالچر آمریکایی بدست آمده است. سلولها در تکه های کوچک یخ زده در دمای منفی۸۰ درجه سانتیگراد نگهداری می شوند. برای شروع رشد سلولی، بعضی از مقادیر مجزا به فلاسکهای کشت (۲۵ سانتیمتر پایین) منتقل شدند،و سلول ها در محیط کشت اصلاح شده Dulbecco (DMEM) تکمیل شده با ۵٪ سرم جنین گاوی (FBS) (JRH Bioscience، Lenexa، KS)، ۱۰۰ U / ml پنی سیلین G و ۱۰۰ / xg / ml استرپتومایسین (Gibco Laboratories، Grand Island)، درست کرده اند. کشت سلولی در دمای ۳۷ درجه سانتیگراد در یک جو مرطوب با ۵٪ CO 2 و هوای ۹۵٪ و تا زمان پیوست، رشد یافته اند. سلول ها هر دو هفته، منتقل میشدند.برای انتقال تک لایه های  مخلوط شده ،از فلاسکها با استفاده از محلول فسفات بافر حاوی آنزیم پروتئولیتیک، دیسپرس (۰٫۵ میلی گرم / میلی لیتر) جدا شدند.محیط کشت هر دو تا سه روز برای تغذیه سلول تغییر داده میشدند. برای آزمایش ها، سلول ها بر روی جلد گذاشته شده و در محیط به مدت ۲۴-۷۲ ساعت روی هم قرار میگرفتند.

بخشی از مقاله انگلیسی:

Tyrosine kinase has been shown to be correlated with the signal transduction for several growth factors, such as epidermal growth factor (EGF) [7], fibroblast growth factor (FGF) [8], platelet-derived growth factor (PDGF) [9], and for insulin [10]. In neuronal cells, these growth factors were reported to cause expression of fast Na ÷ channels in neurons [11], basic FGF to increase /Ca(L) [12,13]. TPK inhibitors, such as genistein, were reported to block the Ca 2÷ current in vascular smooth muscle cells [14], and to activate a non-selective cation channel [15]. However, no reports have been published about the regulation of the fast Na ÷ current (INa(f)) by TPK. In this study, we investigated the possible modulation of the fast Na– channels by TPK in human uterine leiomyosarcoma cells by studying the effect of TPK inhibitors using the whole-cell patch clamp. The leiomyosarcoma cell line (SK-UT-1B), derived from human uterine myometrial cells, was used for the present study because it is a good model for the uterine smooth muscle cells of late-pregnant rats. It was demonstrated that the rat myometrial cells gain fast Na + channels during late pregnancy, which may play an important role in normal labor [16,17]. We discovered that the leiomyosarcoma cell also exhibits INa(f), under the control of one or more factors in serum [18]. In addition, INa(f) was almost 10-fold greater in density in the leiomyosarcoma cell, compared to the pregnant rat myometrial cell. We found that INa(f) is inhibited by both the TPK inhibitor, genistein, and its inactive analog, daidzein. Thus, endogenous TPK activity may not be involved in the regulation of Na ÷ channel activity in myometrial cells.

The human leiomyosarcoma cell line (SK-UT-1B) was obtained from American Type Culture Collection (Rockville, MD). The cells were kept frozen in small aliquots at -80°C. To start cell growth, some aliquots were transferred to culture flasks (25 cm 2 bottom), and the cells were grown in Dulbecco’s modified Eagle’s medium (DMEM) supplemented with 5% fetal bovine serum (FBS) (JRH Bioscience, Lenexa, KS), 100 U/ml penicillin G, and 100 /xg/ml streptomycin (Gibco Laboratories, Grand Island, NY). The cell cultures were maintained at 37°C in a humidified atmosphere of 5% CO 2 and 95% air, and grown until confluency. The cells were passaged every two weeks. For passage, confluent monolayers were dissociated from the flasks using phosphate-buffered saline containing the proteolytic enzyme, dispase (0.5 mg/ml) (Boehringer Mannheim, Indianapolis, IN). The culture medium was changed every 2-3 days for cell ‘feeding’. For patch-clamp experiments, cells were plated on coverslips and incubated in medium for 24-72 h.