دانلود رایگان ترجمه مقاله بررسی نماتدهای حشره‌ زای بیماری‌ زا (ساینس دایرکت – الزویر 2009)

مبتدی (مناسب برای درک مفهوم کلی مطلب) 

2.2 حساسیت به نماتد ها
دو ازمایش ازمایشگاهی برای تعیین حساسیت B. oleae به هر گونه EPN انجام شدند. برای هر دو ازمایش، لارو های نسل سوم جمع اوری شده در آب دمای 20 درجه باقی مانده و در 3 هفتگی استفاده شدند. نرخ استعمال نماتد ها 25 لارو در هرسانتی متر مربع بود و مقدار کل رطوبت سوبسترا 10 درصد بود و 5 تکرار در هر گونه EPN انجام شد.

2.2.1 آزمایش 1
حساسیت لارو B. oleae به آلودگی با نماتد های نسل سوم تعیین شد که به طور طبیعی از زیتون ها در لارو ها در پلیت های پلاستیکی 37 میلی لیتری تا عمق 3 سانتی متری با سوبسترای متشکل از ترکیب 1 به 1 شن غربال شده و خاک گلدان در رطوبت 10 درصد ظهور یافتند. شن قبل از شروع آزمایش آون خشک شده و مقدار رطوبت اولیه خاک 10 درصد بود. نماتد ها به سوبسترای شن/خاک در آب با استفاده از پیپت با سرعت فوق اعمال شدند. در 1 ساعت پس از استعمال نماتد، 5 لارو به هر کاپ اعمال شده و و به درون سوبسترا نفوذ کردند.کاپ ها پوشش دهی شده و در دمای 25 درجه به مدت 24 ساعت انکوبات شدند و بعد از آن حشرات جمع اوری شده و برای تعیین وضعیت عفونی و الودگی حشرات تشریح شدند. چون زمان اجرای ازمایش تنها 24 ساعت بود، و وضعیت عفونت، نه مرگ و میر تعیین شد، تیمار های شاهد عاری از نماتد در این مطالعه استفاده نشدند.
2.2.2 ازمایش 2
برای تایید نتایج ازمایش 1 با استفاده از زیتون های آلوده، دومین ازمایش انجام شد. لوله های پلاستیکی( ، 1200 سانتی متر مربع در سطح خاک) با ترکیب 3 به 1 شن غربال شده از 30 سانتی متر و خاک گلدانی در عمق 4 سانتی متر پرشدند و بعد از آن 120 زینون بر روی سطح سوبسترا قرار داده شد. زیتون های زیر درختان زیتون جمع اوری شده و وضعیت بیماری آن ها نامشخص بود. با این حال فرض شد که هر لوله دارای نسبت یکسانی از ینون های لاروی بود زیرا زیتون ها فورا قبل از ازمایش ترکیب شدند. نماتد ها بر روی زیتون ها با استفاده از اسپری دستی اسپری شدند. آب به صورت شاهد نیز اسپری شد. لوله ها با پوشش پلاستیکی پوشیده شده و در دمای اتاق قرار داده شدند. دما و رطوبت بالای زیتون ها به ترتیب 24 و 18 درصد بود. بعد از 72 ساعت، زیتون ها تشریح شده و خاک برای جمع اوری لارو و شفیره غربال شد. شفیره های درون زیتون های تشریح شده در تحلیل قرار نگرفتند زیرا فرض شد که شفیره ها قبل از استعمال نماتد تشکیل شده اند یعنی زمانی که میوه ها هنوز روی درختان بوده و شفیره های B. oleae حساس نبودند و این بر اساس نتایج مطالعات دیگر بر روی دو بالان است((Belton et al., 1987; Ishibashi and Kondo, 1990; Lindegren and Vail, 1986; Yee and Lacey, 2003).

2.3 دوره زمانی بهینه برای استعمال گونه های EPN در مزرعه
تنها موثر ترین گونه های ازمایشات 1 و 2 یعنی feltiae مورد تست بیشتر قرار گرفت. برای بقای لارو نسل سوم و ازمایشات الودگی و بیماری، لارو های نسل سوم یک روز در میان برداشت شدند. ان هایی که در روز ششم بعد از شروع ظهور برداشت شدند در اب در دمای 20 درجه باقی مانده و طی 1 هفته استفاده شدند

2.3.1 براورد جمعیت لاروی B. oleae درون زیتون های افتاده
برای براورد تعداد لارو های B. oleae حساس به S. feltiae درون زیتون های طی فصل رشد، زیتون از زیر 3 درخت زیتون بر روی محوطه دانشکاه از نوامبر 2006 تا مارس 2007 جمع اوری شدند. درختان بر ااس سطح بالای الودگی مشاهده شده سال قبلی انتخاب شدند. در هر تاریخ نمونه برداری، زیتون های جمع اوری شده ترکیب شده و 500 زیتون به صور تصادفی انتخاب شدند. لارو های S. OLEA درون زیتون وقتی در 1 گالن سر بسته انکوبات شدند از میوه خارج شدند. لارو ها شمارش شده و به دو گروه تقسیم شدند: 3 میلی متر و بزرگ تر، کوچک تر از 3 میلی متر

2.3.2 کارایی در برابر B. oleae افتاده به خاک بعد از استعمال نماتد نسل سوم
کارایی S. feltiae استعمال شده به خاک قبل از قرار دادن زیتون های الوده در سطح با استفاده از نماتد های تجاری ارزیابی شد. بخش کوچکی از بچ به 300 میلی لیتر آب افزوده شده و 15دقیقه هم زده شده و طی 12 ساعت استعمال شد. پروتکل های ازمایشی مشابه با ازمایش 2 بود. لارو های نسل سوم بر روی زیتون های الوده سوبسترا در اولین تیمار استعمال شدند. در دومین تیمار، نماتدهای نسل بر روی سوبسترا 1 ساعت قبل از قرار دادن زینون ها بر روی خاک استعمال شدند. سپس 10 میلی لیتر آب بر روی زیتون ها برای تامین رطوبت استعمال شدند. آب بدون نماتد بر روی زیتون ها به صورت شاهد استعمال شدند. مقدار کل رطوبت سوبسترا بعد از اسپری 10 درصد در همه تیمار ها بود.

2.3.3 اثر دما بر روی بقای گونه EPN
برای تعیین دوره بهینه زمان برای استعمال نماتد، اثر دمای فصلی بر روی بقای موثر ترین گونه از ازمایشات 1 و 2،S. feltiae بررسی شدند. آزمایشات در سه دمای نوسانی بر اساس ماکزیمم و مینیمم دمای روزانه طی ماه های اکتبر تا دسامبر صورت گرفت. این دوره زمانی بود که نسبت زیادی از لارو های از میوه برای تولید شفیره در خاک خارج می شوند( کاپتوس 1984). داده های دما در 25 سال توسط ایستگاه هوشناسی ارایه شد. و اتاقک های رشد با یکی از سه رژیم حرارتی با حداقل و حداکثر دمای 10-27، 6-18 و 3-12 تنظیم شدند. در طی 24 ساعت، دما در رژیم 10-27 درجه با الگوی زیر نوسان داشت: 8 ساعت در 27 درجه، 4 ساعت در 17 درجه، 8 ساعت در 10 درجه و 4 ساعت در 17 درجه. در 6-18 و 3-12 درجه تعداد ساعت در ماکزمیم و می نمیمم دما برابر با 10-27 درجه بود ولی دما های 4 ساعت، 12 و 7 درچه بود.
یک هزار لارو نسل سوم S. feltiae به اب مقطر به میزان 25 گرم شن اتوکلاو درون لوله سانتریفیوژ پلاستیکی 50 ملیلیتری با انتهای مخروطی افزوده شد. مقدار کل رطوبت شن در همه لوله ها 10 درصد بود. برای هر رژیم دمایی، 90 قسمت تهیه شد. در لوله های شاهد، 10 لوله ذر دمای 25 درجه انکوبات شد و بعد از آن نماتد های نسل سوم از شن استخراج شد. 80 لوله باقی مانده وزن شده و پارافیلم پوشش دهی شده و در دمای طرح انکوبات شدند. هر 4 روز، لوله ها وزن شده و آب مقطر کافی به آن ها برای حفظ مقدار رطوبت شن به میزان 10 درصد افزوده شده و پارافیلم تعویض شد. لارو های نسل سوم از شن در 10 لوله تصادفی در هر هفته استحراح شده و تحت میکروسکوپ شمارش شدند. تعداد لارو های بدست امده در فرایند استخراج به صورت معرف تعداد لارو های نسل سوم باقی مانده در نظر گرفته شدند.
برای استخراج لارو های نسل سوم از شن، 40 میلی لیتر آب مقطر به لوله ازمایشی اعمال شده و منافذ با دستمال کاغذی 1 لایه پوشیده شده و پوشش پلاستیکی اصلاح شده بر روی آن ها قرار داده شد. لوله ها درون پتری دیش های 100 میلی متر مربعی واژگون شدند و 60 میلی لیتر آب مقطر به آن ها افزوده شد. لوله های واژگون در دمای 25 درجه به مدت 48 ساعت انکوبات شدند که بعد از آن خارج شده و لارو ها در دیش شمارش شدند

2.3.4 اثر دما بر بیماری زایی گونه EPN
بیماری زایی S. feltiae در پلیت های 24 چاهکی در سه رژیم دمایی ارزیابی شد. 20 لارو به آب مقطر 50 میکرولیتری در هر چاهگ افزوده شد. چاه خا دارای 3 گرم شن اتوکلاو شده با 1 درصد رطوبت بودند. 50 چاهک با لارو و 50 چاهک شاهد در هر رژیم دمایی تست شدند. در چاهک ها با پارافیلم مسدود شده و پلیت ها در رژیم طراحی شده برای سازکاری لارو ها به مدت 24 ساعت انکوبات شدند. حشره جایگزین G. mellonella ذر این ازمایش به دلیل نبود لارو مگس زیتون استفاده شذ. یک لارو G. mellonella به هر چاهک بعد از دوره سازگاری افزوده شده و پلیت ها پوشش دهی شده و به تیمار های دمایی خود بازگشتند. لارو ها هر 12 ساعت چک شدند . برای تعیین مرگ لاروی هر یک از آن ها بعد از نگه داشتن در دمای اتاق به مدت 10 دقیقه پروب شدند و در صورتی که پاسخ نمی داد به صورت مرده تلقی می شد. لارو های مرده با آب برای شست و شوی لارو های چسبیده شده اب کشی شده و در پتری دیش های تمیز با کاغذ صافی به مدت 5 روز دمای 25 درچه انکوبات شدند. و بعد از آن برای تعین وضعیت بیماری زایی تشریح شدند. لارو های زنده بعد از یک هفته با اب ابگشی شده و در پلیت های 24 چاهکی در دمای 25 درجه به مدت 7 روز دیگر انکوبات شده و پساز آن حشرات مرده برای تعیین وضعیت الودگی تشریح شدند.

2.4 تولید مثل نماتد در لارو های B. oleae
توانایی تولید مثلی S. feltiae درون B. oleae ارزیابی شد. 50 لارو نسل سوم در معرض 50 IJs/cm درون 10 کاپ پلاستیکی 30 میلی متری قرار داده شده، 5 بارو در هر کاپ قرار داده شده و در 25 سانتی گراد مورد بررسی قرار گرفتند. سوبسترا متشکل از ترکیب 1 به 1 شن غربال شده و خاک کلدان با رطوبت 10 درصد بودند. بعد از 2 روز، حشرات جمع اوری شده و بر روی وایت تراپ در دمای اتاق قرار داده شدند. در طی 3 هفته، شفیره های توسعه یافته به حشرات الوده کنار گذاشته شده و باقی مانده ها به صورت الوده در نظر گرفته شده و به مدت سه هفته برای جمع اوری نماتد های لاور نسل سوم استفاده شدند. شفیره های یکه از آن ها لارو های ایجاد نشده بود برای تعیین حضور EPN درون اجساد تشریح شدند.

2.5 تحلیل آماری
داده های کارایی، بقا و حساسیت با ANOVA( SAS 2002-2003) .و سپس مقایسه میانگین استیودنت، نویمن و کول تحلیل شدند.داده های جمع اوری شده از لارو های 3 میلی متر و بزرگ در در تحلیل ها در نظر گرفته شدند و لارو های کوچک تر هرگز در طی ازمایش ما الوده نشدند. ازمون T به مقایسه نرخ الودگی و بیماری میان زیتون ها و خاک برای هر تیمار EPN پرداخت. مرگ و میر G. mellonella و بقای S. feltiae در دما های مختلف از نظر مرگ و میر شاهد و بقا تصحیح شد. تست کای اسکور برای مقایسه الودگی و بیماری زاییS. Feltiae در دماهای مختلف استفاده شد. داده های ثبت شده به صورت درصد الودگی یا درصد بقا در معرض تبدیل ارک سینوس قبل از تحلیل قرار گرفت. میانگین های تبدیل نشده در همه اشکال نشان داده شده است.